大鼠微量蛋白(mALB)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：大鼠微量蛋白(mALB)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)大鼠血清、血漿、或其它相關(guān)組織液中微量蛋白(mALB)含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠微量蛋白(mALB)水平。用純化的大鼠微量蛋白(mALB)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入微量蛋白(mALB)，再與 HRP 標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的微量蛋白(mALB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度

（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠微量蛋白(mALB)濃度。

試劑盒組成

標(biāo)本要求

1. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2. 不能檢測(cè)含NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
3. 可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔，在、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl，然后在、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻；然后從孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl， 混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl， 濃度分別為 180μg/L，120μg/L  ，60μg/L，30μg/L，15μg/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl（樣品稀釋度為 5 倍）。加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

1. 配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用
2. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。
3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
4. 溫育：操作同 3。
5. 洗滌：操作同 5。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.
7. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
8. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，其 OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，建議做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
7. 底物請(qǐng)避光保存。
8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

檢測(cè)范圍：

10μg/L

規(guī)格：

96 人份/盒

保存條件及有效期

1. 試劑盒保存：；2-8℃。
2. 有效期：6 個(gè)月