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β-興奮*類 快速檢測試劑盒說明書
點擊次數:1398 更新時間:2020-08-11

 

β-興奮*類

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯抗原,樣本中的β-興奮*類藥物將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗β-興奮*類藥抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含β-興奮*類藥物的含量成負相關,與標準曲線比較即可得出相應β-興*劑類藥物的含量。

二、試劑盒特性

  • 試劑盒靈敏度:   0.1ppb
  • 孵育溫度:       25℃
  • 孵育時間:       30min~15min
  • 樣本檢測下限

豬   尿 ··········································  0.3ppb

豬   肉 ··········································  0.6ppb

  • 交叉反應率

克倫特羅(Clenbuterol)·························  100%

西馬特羅(Cimaterol)   ·······················  <4%  

溴布特羅(Brombuterol)   ······················  60%

馬布特羅(Mabuterol)  ·························  108%

班布特羅(Bambuterol)  ······················   <5%

氯丙那林(Clorprenaline)  ·····················  <1%

沙丁胺醇(Salbutamol)  ·························  75%

特布他林(Terbutaline )  ······················  25%

噴布特羅(Penbutolol)  ·························  19%

妥布特羅(Tulobuterol)  ························  23%

菲諾特羅(Fenoterol)  ····························<0.1%

萊克多巴胺(Ractopamine) ······················ <0.1%

  • 樣本回收率

豬 尿、豬 肉  ····························  90%±30%

三、試劑盒組成

1

微量測試孔

每條8孔,一板12條

2

標準液×6瓶

(1ml/瓶)

0ppb

0.1ppb

0.3ppb

0.9ppb

2.7ppb

8.1ppb

3

酶標記物

7ml

紅色帽

4

抗體工作液

10ml

藍色帽

5

底物A液

7ml

白色帽

6

底物B液

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

9

5X樣本提取液

50ml

透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標儀、離心機、恒溫箱、打印機

微量移液器:單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl

試      劑:氫氧化鈉、濃鹽酸

五、樣本前處理步驟

  • 樣本處理前須知

(a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

   (b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結果。

  • 樣本前處理需配制:

配液1   0.2M 鹽酸

取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L。

配液2   1M 氫氧化鈉

    稱取4g 氫氧化鈉固體加去離子水定溶至    

    100ml。

配液3   樣本提取液

    5X樣本提取液用去離子水1:4稀釋。

  • 樣本處理:

(a)豬肉樣本的處理方法

  • 稱取 2 ± 0.05g 均質后的組織于50ml離心管中,加入3ml 0.2M鹽酸(見配液1),充分振蕩3min。
  • 再加入600ul 1M 氫氧化鈉(見配液2)溶液和2.4ml 樣本提取液(見配液3)溶液,充分振蕩3min,室溫4000r/min 以上離心10min。
  • 取20 µl上層液體用于分析。(注:離心后若有脂肪層,去除脂肪層或撥開脂肪層,取清澈液體進行分析)。

樣本稀釋倍數:  4倍

(b)豬尿樣本的處理方法

取20µl清亮尿樣直接測定(如果尿樣渾濁一定

要過濾或4000r/min離心10min,直至得到清亮

尿樣),暫不使用的樣本應冷凍保存。

樣本稀釋倍數:  1倍

六、 酶標免疫分析程序:

  • 測定前應須知:
  • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20~25℃)。
  • 使用之后立即將所有試劑放回2~8℃。
  • 在ELISA分析中的再現性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
  • 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
  • 操作步驟:
  • 從2~8℃冷藏環境中取出所需試劑,室溫(20~25)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
  • 取出框架及需要數量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
  • 配液:將 40ml濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去離子水按照 1:19 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
  • 編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
  • 加標準品/樣本20µl/孔到各自的微孔中,加入酶標記物50µl/孔,然后加入80µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25℃環境反應30min
  • 將孔內液體甩干,用洗滌液250µl/孔洗板4~5次,每次間隔15~30秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
  • 顯色:加入底物A液50µl/孔,再加入底物B液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環境中避光顯色15min
  • 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內讀數),測定每孔OD值。

七、結果判定

結果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含β-*奮劑量成負相關。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.1ppb為1.816;0.3ppb為1.415;0.9ppb為0.74;2.7ppb為0.313;8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb~8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb~0.9ppb,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中β-*奮劑類藥物實際濃度。

2、定量分析

(1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第--個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光率(%)=

B

×100%

B0

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

(2)標準曲線的繪制與計算

以標準品百分吸光率為縱坐標,以β-*奮劑標準品濃度(ng/ml)的半對數為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中β-興奮*類藥物實際濃度。

若利用試劑盒專業分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。

八、 注意事項

  • 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫(20~25℃)會導致所有標準的OD值偏低。
  • 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
  • 混合要均勻,否則會出現重復性不好的現象。
  • 反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
  • 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
  • 不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質和無色的發色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
  • 顯色液若有任何顏色表明變質,應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質。
  • 該試劑盒*佳反應溫度為25℃,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。

九、儲藏條件和保質期

  • 儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。
  • 保 質 期:該產品有效期為1年,生產日期見包裝盒。

提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結果,請放心使用。

 

 

實驗代做服務:

 

免疫組化IHC染色實驗服務

細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務

試劑盒免費代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務實驗服務

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區嗜銀-AGNOR染色實驗服務

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

酶聯免疫(ELISA)技術服務

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術服務

 

染色質免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務

 

多因子液相芯片技術(Luminex)實驗

免疫細胞化學ICC實驗服務

ATP/ADP檢測實驗服務

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實驗服務

PKC活性檢測實驗

非標定量實驗

(Label-free)

 

DIGE技術實驗服務

端粒酶活性檢測實驗

細胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務

NF-KB p65活性檢測實驗

 

慢病毒包裝實驗服務

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