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馬鈴薯卷葉病毒 (PLRV)ELISA試劑盒說明書
點擊次數:1710 更新時間:2016-02-29

馬鈴薯卷葉病毒 (PLRV)酶聯免疫分析(ELISA)

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于檢測植物組織,細胞上清及相關液體樣本中馬鈴薯卷葉病毒 (PLRV)水平。

實驗原理:

  本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法(ELISA)測定標本中馬鈴薯卷葉病毒 (PLRV)。用純化的馬鈴薯卷葉病毒 (PLRV)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中馬鈴薯卷葉病毒 (PLRV)相結合經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的馬鈴薯卷葉病毒 (PLRV)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中馬鈴薯卷葉病毒 (PLRV)的存在與否。

 

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8保存

陰性對照

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8保存

陽性對照

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8保存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8保存

 

樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步驟:

  1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
  2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
  3. 溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。  
  4. 配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
  7. 溫育:操作同3
  8. 洗滌:操作同5
  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘
  10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

結果判定:

  試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

  臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定:樣品OD< 臨界值(CUT OFF)者為馬鈴薯卷葉病毒 (PLRV)陰性

  陽性判定:樣品OD臨界值(CUT OFF)者為馬鈴薯卷葉病毒 (PLRV)陽性

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

  1. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。

 

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:2-8

2.有效期:6個月

 

滬公網安備 31011802001676號

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