呋喃唑酮代謝物快速檢測試劑盒說明書 |
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呋喃唑酮代謝物 快速檢測試劑盒說明書 一、原理 本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物呋喃唑酮代謝物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗呋喃唑酮代謝物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含殘留物呋喃唑酮代謝物的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物呋喃唑酮代謝物的含量。 二、試劑盒特性
肌肉組織 ································· 0.05ppb 雞蛋 ······································· 0.05ppb 蜂蜜 ········································· 0.05ppb
呋喃唑酮代謝物 ································· 100% 呋喃它酮代謝物 ······························· ＜0.1% 呋喃妥因代謝物 ······························· ＜0.1% 呋喃西林代謝物 ······························· ＜0.1%
肌肉組織 ································· 95%±25% 雞蛋 ······································ 95%±25% 蜂蜜 ······································· 85%±23% 三、試劑盒組成
四、所用儀器、試劑 具備的儀器：酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱、恒溫水浴鍋 微量移液器：單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl 試 劑：氫氧化鈉、K2HPO4·3H2O、正己烷、乙酸乙酯、濃HCl 五、樣本前處理步驟
（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。 （b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
配液1 0.1M K2HPO4溶液： 稱11.4g K2HPO4·3H2O加去離子水溶解定溶至500ml。 配液2 1M HCl 溶液： 取8.6ml濃HCl加去離子水定容至100ml。 配液3 1M NaOH溶液： 稱4g NaOH加去離子水定容至100ml 配液4 樣本復(fù)溶液： 將2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按1：1稀釋。
（a）肌肉、雞蛋樣本處理方法 稱取1±0.05g的均質(zhì)物，分別加入4ml的蒸餾水，0.5ml 1M HCl溶液和100µl衍生化試劑，充分振蕩2min； 在37℃過夜孵育（大約16h）或56℃水浴中孵育(2h)； 分別加入5ml 0.1M K2HPO4溶液，0.4ml 1M NaOH溶液和6ml乙酸乙酯，充分振蕩30s； 在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min（如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象或乙酸乙酯層不足 3ml ，在 80 ℃ 水浴孵育樣品10min 并重復(fù)離心；或提高轉(zhuǎn)速和延長離心時間重復(fù)離心）； 取出3ml的乙酸乙酯到另一個容器中于50℃氮?dú)?/span>/空氣吹干。 用2ml正己烷溶解干燥物，再加入1ml樣本復(fù)溶液充分混合30s；在室溫下4000r/min以上離心10min；去除上層正己烷相（如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，則去除上層正己烷后于70℃水浴10-20min，重復(fù)離心）； 取50µl下層用于分析。 樣本稀釋倍數(shù): 2倍 （b）蜂蜜樣本處理方法 稱取2±0.05g的均質(zhì)物（蜂蜜），分別加入4ml的蒸餾水，0.5ml 1M HCl溶液和100µl衍生化試劑，充分振蕩2min； 在37℃過夜孵育（大約16h）或56℃水浴中孵育(2h)； 分別加入5ml 0.1M K2HPO4溶液，0.4ml 1M NaOH溶液和6ml乙酸乙酯，充分振蕩30s； 在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min（如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象或乙酸乙酯層不足 3ml ，在 80 ℃ 水浴孵育樣品10min 并重復(fù)離心；或提高轉(zhuǎn)速和延長離心時間重復(fù)離心）； 取出3ml的乙酸乙酯到另一個容器中于50℃氮?dú)?/span>/空氣吹干； 用2ml正己烷溶解干燥物，再加入1ml樣本復(fù)溶液充分混合30s；在室溫下4000r/min以上離心10min；去除上層正己烷相（如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，則去除上層正己烷后于70℃水浴10-20min，重復(fù)離心）； 取50µl下層用于分析。 樣本稀釋倍數(shù): 1倍 六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
七、結(jié)果判定 結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含呋喃唑酮代謝物量成負(fù)相關(guān)。 1、粗略判定： 用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.01ppb為1.816；0.03ppb為1.415；0.09ppb為0.74；0.27ppb為0.313；0.81ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是0.27ppb～0.81ppb；樣本2的濃度范圍是0.03ppb～0.09ppb，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃唑酮代謝物實(shí)際濃度。 2、定量分析 （1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以di一個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值 （2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以呋喃唑酮代謝物標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃唑酮代謝物實(shí)際濃度。 若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來索取） 八、 注意事項(xiàng)
九、儲藏條件和保質(zhì)期
提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請放心使用。
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